DT40 雞淋巴瘤細胞/鏡像綺點（iCell）介紹

DT40是來自Hyline SC雞法氏囊淋巴細胞株經(jīng)鳥類白血病病毒誘導建株的。原始淋巴瘤用羅氏相關病毒1(RAV-1)感染出生１天的小雞得到。法氏囊中生成的腫瘤制成細胞懸液后通過靜脈注射輸入同基因型的受體小雞。經(jīng)過一次體內(nèi)移植后，建立了DT40細胞株。 這株細胞包含的前病毒基因整合在c-myc原癌基因的上游，表達的c-myc RNA水平較高。它缺少一個正常c-myc基因，但含有兩個拷貝ALV去調(diào)控的myc基因。這株細胞保留了重排免疫球蛋白輕鏈基因(IgL)的能力。 在IgL位點，DT40包含一個重排和一個胚系同源基因。c-rel基因和v-rel癌基因在DT40細胞株中都能誘導組織相容性(MHC)II類抗原表達。v-rel 誘導的MHCII表達比c-rel誘導快，且其有效性在數(shù)周后達到c-rel的50倍。這株細胞呈淋巴母細胞表型。傳染性檢測表明DT40釋放低水平的傳染性RAV-1。這株細胞可以用于穩(wěn)轉(zhuǎn)研究。

細胞特性

1） 來源：法氏囊，淋巴瘤

2） 形態(tài)：淋巴母細胞，懸浮

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用。

DT40 雞淋巴瘤細胞/鏡像綺點（iCell）接收后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3） 將T25瓶中的培養(yǎng)基離心后，去上清，添加6ml*培養(yǎng)基，加入新的T25瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

4) 如果細胞長滿80%請及時進行細胞傳代.

5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備DMEM培養(yǎng)基；北美胎牛血清，10%；雞血清，5%；b-巰基乙醇，0.05mM；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為類；

1，細胞凍存時，取上清，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產(chǎn)品和服務介紹：

       一、原代細胞服務：
              各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
              多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
              原代細胞分離和培養(yǎng)相關試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
              原代細胞相關技術服務及整體實驗外包服務

       二、細胞系服務：
              細胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關說明書
              細胞系培養(yǎng)過程的技術指導
              細胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關生長因子、試劑等

       三、iPS細胞服務：
              iPS細胞基礎培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
              iPS細胞增殖及冷凍保存
              iPS基礎培養(yǎng)技術實習
              新藥及實驗儀器上市前評估

       四、其他技術外包服務、客戶定制服務等

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